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55株脑膜炎奈瑟菌对12种抗生素体外敏感性试验

来源:中国热带医学
摘要:【摘要】目的了解脑膜炎奈瑟菌(Nm)的耐药性,为指导预防和临床用药。方法采用2006年美国临床试验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)推荐的纸片扩散法和最低抑菌浓度法测定深圳市55株Nm对抗生素的敏感性并进行分析。【关键词】脑膜炎奈瑟菌。抗生素。...

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【摘要】    目的 了解脑膜炎奈瑟菌(Nm)的耐药性,为指导预防和临床用药。方法 采用2006年美国临床试验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)推荐的纸片扩散法和最低抑菌浓度法测定深圳市55株Nm对抗生素的敏感性并进行分析。结果 所有菌株对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平敏感,而全部菌株对复方新诺明耐药,32.7%(18/55)的菌株对环丙沙星耐药,38.2%(21/55)的菌株对萘啶酸耐药,有多重耐药现象。结论 Nm菌株对磺胺类药物耐药情况严重。在临床和预防用药时,应慎重使用。

【关键词】  脑膜炎奈瑟菌;抗生素;敏感性;耐药率

  Test of susceptibility of 55 strains of Neisseria meningitidis to 12 antimacrobial agents in vitro.

  SUN Jian, HUANG Min-rui, JU Chang-yan.

  Nanshan District Center for Disease Control and Prevention, Shenzhen 518054, Guangdong, P. R.China
   
  Abstract:Objective  To test the susceptibility of 55 Meningococci isolated from carriers in Shenzhen and provide reference for prophylaxis and therapy.  Methods  According to 2006 CLSI/NCCLS, K-B assay and MIC assay were carried to testthe susceptibility of 55 meningococci to antibiotics.  Results  All 55 Meningococci were sensitive to penicillin, ampicilin, ceftriaxone, cefotaxime, meropenem, minocycline, chloramphenicol succinate, rifampicin, and all isolates were resistant to compound sulfamethoxazole.  About 32.7%(18/55) of isolates were resistant to ciprofloxacin, and 38.2% of them resistant to nalidixic acid.  Conclusion  Meningococci is widely resistant to sulfanilamide and caution is indicated in clinical use of sulfanilamide for prophylaxis and treatment.
   
  Key words:Nesseria meningitidis; Antibiotics; Susceptibility; Drug surveillance

    1941~1943年Schoenback和Phair报道了脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)对磺胺药物的耐药性,但当时对临床治疗尚未产生重大的影响,直到1963年在加利福尼亚的两个兵营发现耐磺胺Nm菌株,并开始在世界范围广泛出现,才引起对Nm耐药性的高度重视。
        
  为给临床医生选用药物治疗和预防性服药提供参考,及了解本地区的Nm耐药性变迁情况,我们采用2006年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)发布的纸片扩散法(K-B)和最低抑菌浓度法(MIC)[1]对55株Nm进行了青霉素类、头孢类、氟喹诺酮类、喹诺酮类等12种抗生素的药敏试验,现将结果分析报告于下。

  1  材料与方法

  1.1  材料

  1.1.1  标本及菌株来源 

  2005年11月~2006年5月采集深圳市健康人群咽拭子1255份,分离到55株Nm,其中B群49株,C群4株和29E 2株。用于抗生素敏感性试验的质量控制菌株为大肠埃希菌ATCC25922和肺炎链球菌ATCC49619。

  1.1.2 培养基 

  含5%羊血的Mueller-Hinton琼脂(深圳市百安公司),用于K-B法。
        
  调节MH肉汤钙离子的浓度至50μg/ml(因阳离子低可使抑菌环偏小),并添加5%裂解的马血(制备溶解的马血LHB,用冻融法至红血球完全溶解),制成马血MH肉汤,用于MIC法。

  1.1.3  药物纸片 

  采用的抗生素纸片有头孢噻肟,头孢曲松,美罗培南,阿齐霉素,米诺环素,环丙沙星,萘啶酸,复方新诺明,氯霉素,和利福平,购自杭州天和微生物公司。青霉素,氨苄西林为粉剂,购自中诺药业有限公司。

  1.2 方法

  1.2.1 MIC法

  用于青霉素和氨苄西林的敏感性试验。用马血MH肉汤做稀释液,稀释青霉素的终浓度为0.03,0.06,0.12μg/mL,氨苄西林的终浓度为0.06,0.12,0.24μg/mL,每管1mL;用生理盐水将0.5MCF的菌悬液稀释1:200,分别取0.05mL加入各含药试管中,混匀然后接种肺炎链球菌(ATCC49619)做阳性对照,不含抗菌药物只含菌的阳性对照,不含抗菌药和菌液的阴性对照,置37℃ 5%CO2温箱培养18h,观察结果。MIC的判定:药物浓度管外观清晰者视为无菌生长,无菌生长最高稀释度管的药物浓度即为待检菌的MIC。

  1.2.2 K-B法 

  用于头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平、环丙沙星、复方新诺明、萘啶酸10种抗生素的敏感性试验。刮取新鲜菌苔,用生理盐水制成0.5MCF的菌悬液,取1ml菌悬液均匀涂布在含5%羊血的MH琼脂上,吸除多余的菌液,室温放置20min,用灭菌的镊子夹取药片小心放在涂菌的MH血琼脂上,每个平板放4个不同药片,同时用肺炎链球菌ATCC49619和大肠杆菌ATCC25922做阳性对照,不加菌液的MH血琼脂做阴性对照,于37℃5%CO2中培养24h,阳性及阴性对照的结果正确,即可用尺量抑菌环直径,记录结果。
      
  大肠埃希菌ATCC25922用于环丙沙星、萘啶酸和复方新诺明药敏试验质量控制,肺炎链球菌ATCC49619用于其他9种抗生素的质量控制。

  2 结果

  2.1 菌株对抗生素敏感性试验结果 

  55株Nm均对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平8种抗生素敏感。94.5%(52/55)的菌株对阿齐霉素敏感,49.1%(27/55)的菌株对环丙沙星敏感,61.8%(34/55)的菌株对萘啶酸敏感。55株Nm均对复方新诺明耐药,32.7%(18/55)的菌株对环丙沙星耐药,18.2%(10/55)的菌株对环丙沙星表现为“中介”,38.2%(21/55)的菌株对萘啶酸耐药。
        
  本试验发现有3株Nm菌对阿齐霉素的抑菌环分别为15,15,18mm,重复进行Nm鉴定和药敏试验,结果相同。根据2006 CLSI手册,由于尚不存在或罕见阿齐霉素的耐药Nm菌,因此手册中仅规定了对阿齐霉素抑菌环≥20mm的为“敏感”,没有中介和耐药的分类,本研究中将这3株Nm的结果归为“耐药”。

  2.2 不同血清群Nm菌株对抗生素敏感性试验结果 

  49株B群Nm均对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平8种抗生素敏感;阿齐霉素、环丙沙星、萘啶酸和复方新诺明的耐药率依序分别为6.1%(3/49)、30.6%(15/49)、34.7%(17/49)和100%。
      
  4株C群Nm和2株29E群Nm对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平、阿齐霉素9种抗生素敏感。4株C群Nm对环丙沙星、萘啶酸和复方新诺明的耐药株数依序分别为2、2、4株,2株29E Nm对三种抗生素的耐药株依序为1、2、2株。部分Nm菌株表现出多重耐药。B群49株中二重耐药20株(40.8%),三重耐药14株(28.6%);C群4株中二耐和三耐各2株;29E2株中二耐2株,一耐1株。

  3 讨论
        
  Nm对多数抗生素敏感,但对磺胺类药物的耐药比较多见。1996年我国的监测结果[2]30%左右的菌株对磺胺耐药,4%的菌株对利福平耐药,2005年我国的监测结果[3]73%的菌株对复方新诺明耐药,19%对环丙沙星耐药,对左氧氟沙星的耐药率达83%。本结果中Nm对复方新诺明的耐药率为100%,高于以上。
        
  不同地区分离的Nm菌株耐药谱不完全相同,可能是各地区经济发展程度不同及用药习惯不同造成。福建省监测结果[4]Nm耐药率最高的为阿莫西林(88.9%),其次是红霉素(55.6%),再次是卡那霉素及复方新诺明(分别为44.4% 和33.3% )。湖北省的监测结果[5]80%的A 群Nm对磺胺类药物耐药。另外,有报道显示[3],病人分离株和健康携带者分离株的耐药情况不同,没有明确的联系,病人分离株并没有表现出更高的耐药率或更广的耐药谱。国外研究也显示,Nm对某些预防用药产生耐药:最常见的为磺胺类,其次为利福平(不常见)和环丙沙星(偶见)[6]。
      
  为了防止耐药Nm的增多,首先要避免抗生素的滥用;其次,鉴于Nm对磺胺类药物耐药率较高,无论在临床上还是预防服药,选择磺胺类药物都要慎重。建议最好在用药前,以常规的K-B法或MIC法检测Nm株的耐药性,为选用药物提供参考。

【参考文献】
    [1]Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimierobial susceptibility testing;sixteenth informational supplement. CLSI document M100-S16, 2006,26:62~63.

  [2]李德好,胡绪敬,徐丽,等. 脑膜炎奈瑟氏菌对常用抗菌药物敏感性监测[J]. 疾病监测, 1996,11(11):405.

  [3]徐丽,邵祝军,李马超,等. 脑膜炎奈瑟菌对12种抗菌药物体外敏感性检测[J]. 中国计划免疫, 2006,12(1):53~55.

  [4]吕静,刘力,孙净,等. 湖北省2000~2005年流行性脑脊髓膜炎监测分析[J]. 公共卫生与预防医学, 2006,17(4):41~44.

  [5]原灵,郭维植,董新平,等. 福建省2005年流脑带菌率及免疫水平调查[J]. 海峡预防医学杂志, 2006,12(3):28~29.

  [6]陈民钧. 美国临床实验室标准化研究所2005年版有关药敏试验标准化更新要点[J]. 中华检验医学杂志, 2005,28(4):449~451.


作者单位:深圳市南山区疾病预防控制中心,广东 深圳 518054.

作者: 孙健,黄锐敏,鞠长燕 2010-1-13
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