医源世界
首页合作平台在线期刊中华中西医杂志2004年第5卷第17期论著

VEGF HGF对内皮细胞 平滑肌细胞生长和细胞生长因子的影响

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的探讨VEGF、HGF对血管壁细胞生长增殖和细胞因子分泌的影响。方法用MTT法检测内皮细胞和平滑肌细胞的增殖状态,用ELISA方法检测VEGF的分泌水平。结果VEGF、HGF对内皮细胞增殖有促进作用,HGF能增强VEGF的促增殖作用。HGF能促进平滑肌细胞的增殖,VEGF对平滑肌细胞的增殖无明显影响。...

点击显示 收起

  【摘要】 目的 探讨VEGF、HGF对血管壁细胞生长增殖和细胞因子分泌的影响。方法 用MTT法检测内皮细胞和平滑肌细胞的增殖状态,用ELISA方法检测VEGF的分泌水平。结果 VEGF、HGF对内皮细胞增殖有促进作用,HGF能增强VEGF的促增殖作用。HGF能促进平滑肌细胞的增殖,VEGF对平滑肌细胞的增殖无明显影响。HGF能促进平滑肌细胞VEGF的分泌。结论 VEGF、HGF都能促进内皮细胞的增殖,HGF促进增殖作用可能是通过刺激平滑肌细胞VEGF的分泌完成。

  关键词 内皮生长因子 肝细胞生长因子 细胞培养 内皮细胞 平滑肌细胞

  The effects of VEGF,HGF on the proliferation and cellular  growth factor of ECs and SMCs

    Chen Shuanghong,Tian Li,Wang Fasuo,et al. Shanghai Naval Medical Institute,hanghai200433.

  【Abstract】 Objective To explore effects of VEGF,HGF on the proliferation and cellular growth factor of ECs and SMCs.Methods To research the proliferation of ECs and SMCs with MTT and to detect the secretion of SMCs’VEGF with ELISA.Results VEGF,HGF incite the proliferation of ECs.HGF incite the proliferation of SMCs and the secretion of SMCs’VEGF,and HGF also enhance the action of VEGF.Conclusion VEGF,HGF incite the proliferaˉtion of ECs.HGF enhance the proliferation of ECs by inciting the secretion of SMCs’VEGF. 

  Key words VEGF HGF cell culture endothelial cells smooth muscle cells

  血管内皮生长因子(VEGF)是由血管内皮细胞分泌的一种强烈的有丝分裂原,能有效地刺激内皮细胞迁移和复制,诱导血小板活化因子和内皮纤溶酶原活化因子的产生。因而在内皮修复、血管再生,治疗血管动脉粥样硬化、血栓、钙化等临床疾病中有重要意义。肝细胞生长因子(Heapaˉcyte growth factor,HGF),是一种间质衍生的多功能生长因子,最初认为是由肝脏分泌至血液中的一种特异性因子,后来证实在成人多种组织及胚胎组织的成纤维细胞中都有HGF的基因表达,在血管壁的内皮细胞和平滑肌细胞中也存在HGF的局部系统。临床研究表明,在一些心血管系统疾病中都出现VEGF、HGF分泌的异常。因此,在生理状态下VEGF、HGF可以通过自分泌或旁分泌的形式影响血管壁,从而进一步调节血管的局部功能。

  1 材料与方法

  1.1 材料 (1)内皮细胞和平滑肌细胞均来自于新生牛的主动脉;(2)细胞培养板(美国Falcon公司);(3)VEGF、HGF(Sigma公司);(4)VEGF ELISA检测试剂(Sigma公司);(5)新生牛血清(华美生物工程公司)。

  1.2 方法

  1.2.1 细胞培养 内皮细胞、平滑肌细胞用酶消化法分离自新生牛主动脉内膜和中膜 [1]  ,原代培养并传至3~6代的细胞备用。

  1.2.2 MTT法测定细胞的增殖

  1.2.3 ELISA法检测细胞培养上清VEGF的分泌水平 [2,3]   传代的内皮细胞和平滑肌细胞以3×10 4 个/ml浓度,每孔100μl的量种植于96孔培养板,培养24h后,以50ng/ml、100ng/ml的浓度加入HGF,每个浓度梯度设立3个平衡孔,同时设立空白对照孔,分别在加药后3h,加药后12h收集细胞培养上清液,离心后70℃保存备用。不同时相点样品收集齐后,用ELISA试剂盒检测VEGF水平,操作按说明书进行,试剂盒的检测范围为20.0~2500.0pg/ml。

  2 结果

  与空白对照相比加VEGF、HGF10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml组的内皮细胞增殖明显,并呈一定的剂量依赖性,10ng/ml组与50ng/ml组相比P<0.05,50ng/ml组与100ng/ml组相比差异无显著性。VEGF对平滑肌细胞增殖无明显影响,HGF能促进平滑肌细胞的增殖,同时加入VEGF、HGF对内皮细胞增殖的影响增强。见表1~3。空白对照及加入HGF培养后3h、12h的平滑肌细胞培养上清测出VEGF,与空白对照相比,加药后上清中VEGF的含量明显增加。对内皮细胞无影响,见表4。

  表1 HGF组内皮细胞与平滑肌细胞增殖MTT比色的OD值 (略)

  注: ˇ 与对照组相比差异有显著性, ▲ 与次级剂量组相比差异有显著性

  表2 VEGF组内皮细胞与平滑肌细胞增殖MTT比色的OD值 (略)

  注: ˇ 与对照组相比差异有显著性, ▲ 与次级剂量组相比差异有显著性

  表3 VEGF+HGF组内皮细胞与平滑肌细胞增殖MTT比色的OD值 (略)
  
  注: ˇ 与对照组相比差异有显著性, ▲ 与次级剂量组相比差异有显著性

  表4 平滑肌细胞培养上清VEGF的含量 (略)

  注: ˇ 与对照组相比差异有显著性, ▲ 与次级剂量组相比差异有显著性

  3 讨论

  VEGF是一种糖蛋白,其高亲和位点KDR、Fltl只存在于内皮细胞中,因此其强有丝分裂原和改善血管通透性的作用是特异性地通过内皮细胞而表现出来 [4]  。VEGF与特异性的高亲和性受体结合后,促进内皮细胞的有丝分裂和内皮的生长和增殖,因而能有效地维持血管内皮的完整性,促进血管侧枝循环的建立和新生血管的形成。HGF是由α重链和β轻链组成的二聚体,是表皮细胞的有丝分裂原,刺激作用具有多向性,Ode.K等用HGF的基因载体转染内皮细胞和平滑肌细胞,可在培养上清中测出HGF的分泌,用这种培养上清加入内皮细胞培养体系可刺激内皮细胞的增殖。本实验中用重组的VEGF、HGF100ng/ml剂量时,对内皮细胞增殖的刺激作用明显,VEGF50ng/ml为最适剂量。同时加入VEGF、HGF对内皮增殖的促进作用更明显,表明在HGF增强内VEGF的促增殖作用。因此,VEGF、HGF在皮损伤修复中有重要意义。 VEGFmRNA主要存在于平滑肌细胞和心肌细胞中,也是一种内皮细胞特异性诱导因子,能特异性地诱导内皮细胞的分裂、增殖、迁移、生成新生血管,同时还能诱导血小板活化因子增加血管通透性、适当恢复内皮舒张因子维持血管的正常功能,VEGF基因治疗血管闭塞性疾病的临床已初见成效。本研究在内皮细胞和平滑肌细胞培养上清中加入HGF,在加药后的平滑肌细胞的培养上清检测到VEGF的分泌,与对照组相比差异有显著性。内皮细胞培养上清液未检测到VEGF。可见,HGF对内皮细胞的调节作用,一方面通过直接的刺激效应产生,另一方面通过调节内皮细胞的周细胞(平滑肌细胞)的功能而产生间接效应,HGF与VEGF在内皮细胞损伤修复中具相似的功能,从而在治疗内皮损伤性疾病中有一定的协同作用。

  参考文献

  1 姜宗来,陈双红,张炎,等.与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学和生长增殖.解剖学报,2000,31(3):274-276.

  2 陈双红,姜宗来,张炎,等.与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血因子和粘附分子.解剖学报,2000,31(4):347-351.

  3 陈双红,封岩,蒋逸风,等.肝细胞生长因子对内皮细胞、平滑肌细胞生物学特性的影响.第13次全国干扰素及细胞因子学术会议论文集,2002,116-118.

  4 张曼,沈乐,周爱儒.缺氧条件下血管活性因子对血管细胞中VEGF表达的影响.中国生物化学与分子生物学报,2001,17(1):121-123. 

  作者单位:200433上海海军医学研究所 

作者: 陈双红 田 力 王发锁 蒋逸风 2005-5-30
医学百科App—中西医基础知识学习工具
  • 相关内容
  • 近期更新
  • 热文榜
  • 医学百科App—健康测试工具