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乙肝二对半e抗原假阳性的原因分析

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的探讨导致乙肝二对半e抗原假阳性的原因。方法用ELISA法测定350份离心与不离心抗凝血标本的HBeAg。结果不离心标本的HBeAg单独阳性率很高,离心标本基本无此情况。结论假阳性与不离心有关,全血中有许多与HBeAg有共同抗原颗粒物质,在酶免过程中出现非特异性结合,而造成假阳性,洗板不清可能也是造成假......

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  【摘要】 目的  探讨导致乙肝二对半e抗原假阳性的原因。 方法  用ELISA法测定350份离心与不离心抗凝血标本的HBeAg。 结果  不离心标本的HBeAg单独阳性率很高,离心标本基本无此情况。 结论  假阳性与不离心有关,全血中有许多与HBeAg有共同抗原颗粒物质,在酶免过程中出现非特异性结合,而造成假阳性,洗板不清可能也是造成假阳性的原因之一。故要求对单HBeAg阳性标本进行离心,以提高测定结果的准确性。
       
  The analysis of the false postivie causes of the HBeAg
     
  Bao Dongwu
    
  Nanyang Medical Higher Training School,Henan473058.
   
  【Abstract】 Objective To investigate the reason of causing e-antigen false positive.Methods To use ELISA method to measure350samples centrifuge and centrifugeless uncoagulate sample's of HBeAg.Results The percentage of the positive of the centrifugeless sample's single HBeAg is high.Centrifuge sample is quite different from it.Conclusion The false positive has something to do with centrifugelessness.In the blood,there are lots of particular matters that have common antigen with HBeAg.During the enzymatic method there are unspecificity combinations,which causes the false positive.Maybe untidiness is one of the reasons with causes the false positive.So centrifuge is needed to HBeAg single positive sample,to improve the accuracy of measuring results.

  【Key words】 HBeAg ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)
      
  检测HBV的血清学方法很多,目前,ELISA应用较广泛。几年来,在二对半检测中遇到单HBeAg阳性或HBeAg、抗-HBe同时阳性的特模式,我们将标本做如下处理:重新离心、冰箱保存,复查,发现结果均为阴性。发现同行也有报道如此情况 [1] ,以及溶血及脂浊样品对ELISA检测的影响 [2] 。基于上述这些现象,我们进行如下探讨。

  1 材料与方法
    
  1.1 实验仪器 Labsysten Dragon MK2酶标仪,well wash4mk2洗板机,上海手术器械厂产800-2型离心机,美国PE公司PE480DNA扩增仪。
   
  1.2 标本 350份枸橼酸抗凝血标本,均来源于我院2004年1月~12月门诊及住院病人。
   
  1.3 试剂 科华公司和华美公司HBeAg试剂盒,新创HDV-IgM试剂盒,HBV-DNA试剂盒。
   
  1.4 方法 严格按照试剂盒说明书操作。(1)枸橼酸抗凝标本350份混匀不离心和3000r/min离心5min,10min,分别用科华和华美试剂同时进行检测。(2)结果判断:样品OD值/阴性对照,OD值>2.1为阳性,否则为阴性。(3)对350例标本作HDV-IgM检测,同时作HBV-DNA检测。
    
  2 结果
    
  对350例标本作HDV-IgM检测,结果为阴性。对350例标本作HBV-DNA检测,结果也为阴性。350份枸橼酸抗凝血标本两种试剂离心与不离心检测结果对比见表1。
    
  表1 350份枸橼酸抗凝血标本两种试剂离心与不离心检测结果对比(略)
    
  3 讨论
    
  (1)HDV是缺陷病毒,当HDV和HBV重叠感染,HBV为HDV复制提供HBsAg [3] ,故能表现HBsAg阴性而HBeAg阳性的情况。通过对HDV-IgM测定结果表明,单HBeAg阳性与HDV重叠感染无关。(2)HBeAg存在于乙肝病毒Dane颗粒的核心部分,HBeAg存在表明HBV处于增殖和复制状态,具有强烈的传染性。通过对HBV-DNA的检测结果为阴性,表明体内并无HBV-DNA,故我们认为出现的HBeAg为假阳性。(3)HBeAg是前C区基因区表达,同时HBcAg在C区基因区表达 [4] ,HBeAg的纯化是产生纯抗-HBe的前提,故在包被过程所用抗-HBe不纯可能是造成假阳性的原因之一。(4)全血中有许多HBeAg的共同抗原类的颗粒物质,在不离心的情况下悬浮在血浆中,故在酶免过程中出现非特异性结合,而造成假阳性 [5] ;另外可能血中存在许多SOD酶,在洗涤过程中不清而在显色过程中出现非特异性反应,而造成假阳性,同时也有类似报道 [6] 。(5)HBeAg阳性是反应HBV增殖、有传染性的一种有意义的指标之一,在排除HBsAg勾带反应,HDV-IgM阳性,HBV-DNA阳性的情况下,单独出现这样的结果需慎重报告。(6)血清中的细胞成分中含有过氧化物酶成分,产生辣根过氧化物酶样作用,当离心不充分的血清、血浆标本加样于反应板孔时,细胞成分粘附于酶标板而不能洗去,会产生酶促反应而呈现阳性显色,导致出现一些假阳性 [7] 。

  参考文献
    
  1 王火生,韩星,徐六妹,等.HBVe系统双阳模式复核结果的分析.临床检验杂志,2001,19(6):381.
   
  2 单桂秋,苏建婷.溶血及脂浊样品对ELISA检测HBsAg的影响.临床检验杂志,1999,17(2):102.
   
  3 李梦东.实用传染病学.北京:人民卫生出版社,1998,136-137.

  4 俞树荣.微生物和微生物学检验.北京:人民卫生出版社,1997,380.
   
  5 许斌,韩光宇,程梅,等.血液HBsAg、抗-HCV复检中应采用不同试剂和设置低限灰区.临床检验杂志,1998,16(6):341.
   
  6 杨志成.16例抗-HIV国产试剂检测假阳性报告.中国输血杂志,2000,13(3):206.
   
  7 常立俊.HBeAg酶试剂假阳性原因探讨.华美通讯,1999,1-2:21. 

  作者单位:473058河南南阳南阳医学高等专科学校 

作者: 包东武 2005-6-16
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