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牛磺酸、普罗帕酮混合液抗心律失常量-效关系的研究及其薄层层析

来源:INTERNET
摘要:5mg/kg分别与牛磺酸30mg/kg、100mg/kg、200mg/kg混合液的抗心律失常作用,采用BL-410生物机能实验系统观察混合液对氯化钡心律失常模型的影响。②观察不同比例混合液对心脏血流动力学的影响。血流动力学结果表明200mg/kgTAU与1。5mg/kgPRO对心肌有负性肌力作用。...

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  【摘要】 目的 探索牛磺酸、普罗帕酮最佳混合比例及剂量,混合后成分的鉴定分析。方法 ①观察普罗帕酮1.5mg/kg分别与牛磺酸30mg/kg、100mg/kg、200mg/kg混合液的抗心律失常作用,采用BL-410生物机能实验系统观察混合液对氯化钡心律失常模型的影响。②观察不同比例混合液对心脏血流动力学的影响。③将普罗帕酮、牛磺酸按0.15:0.2%比例混合后放置1h、24h、48h、5d、10d样品分别在硅胶HF 254 荧光板上进行薄层层析,氯仿与甲醇(2:1)作为展开剂,分别与同样含量的普罗帕酮、牛磺酸单剂做对照。普罗帕酮荧光显色,牛磺酸茚三酮作为显色剂。结果 量-效关系显示:1.5mg/kg普罗帕酮与不同牛磺酸混合后对氯化钡模型疗效在牛磺酸剂量为30~100mg/kg间呈剂量依赖性增加。血流动力学结果表明200mg/kgTAU与1.5mg/kg PRO对心肌有负性肌力作用。混合液肉眼可见无色、无沉淀及混浊现象。薄层层析结果:混合液不同时间样品与单剂对照均很好分离,结果一致,均未见新的斑点出现。结论 据药效研究结果及薄层色谱分析结果,初步认为二者混合后无配伍禁忌,仍显示抗心律失常协同作用。1.5mg/kg普罗帕酮与牛磺酸混合最佳剂量在100mg/kg,疗效较显著而且对心脏无显著负性肌力作用。

广泛地研究已明确了牛磺酸(taurine,TAU)安全而广泛的生物效应及药理作用。TAU对心血管系统具有多种药理作用。为了充分利用TAU安全有效的优点,为临床心律失常的治疗提供更有效的治疗手段,我们前期对TAU与普罗帕酮(propafenone,PRO)联合抗心律失常的作用进行了研究,结果已证实二者的协同效应及TAU在一定程度上可克服PRO对心脏的负性肌力作用 [1] 。为了进一步了解二者合用对抗心律失常的最佳有效剂量及其混合后是否存在配伍禁忌,我们对二者联合应用及不同比例混合后抗心律失常效应进行了研究,同时,也观察了不同比例混合液对心脏血流动力学的影响,对混合液进行薄层色谱分析。旨在探讨二者可否组成有效的复方。研究结果如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 动物:Wistar大鼠,体重180~220g,由山西医科大学实验动物中心提供。药品与试剂:普罗帕酮(广州明兴制药厂20021106),牛磺酸原药粉(南京制药厂生产),自制硅胶HF 254 板(5cm×10cm):硅胶HF 254 -0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)(1:3)。其他试剂均为分析纯。仪器BL-410生物机能实验系统软件(成都泰盟科技有限公司产品),紫外荧光灯。

1.2 动物实验

1.2.1 TAU、PRO单剂联合给药与不同混合液给药对氯化钡诱发心律失常疗效比较 [2]。健康大鼠50只,随机分为5组:即盐水对照组(NS)、联合组和混合组(1)、(2)、(3)。NS组:静脉注射(iv)0.1mg/kg NS;联合组:iv TAU溶液30mg/kg后,立即iv PRO溶液1.5mg/kg;混合液组(1):iv含30mg TAU和1.5mg/kg PRO的混合液;混合液组(2):iv含100mg/kg TAU和1.5mg/kg PRO混合液;混合液组(3):iv含200mg/kg TAU和1.5mg/kg PRO混合液。大鼠用10%水合氯醛30mg/kg腹腔注射。麻醉后,仰卧固定,四肢皮下连接心电导联,用电脑BL-410多媒体生物信号记录分析系统连续监测标准Ⅱ导心电图(ECG)。不正常者剔除。心电正常者按以上分组舌下静脉给药,给药后3min iv0.3%氯化钡溶液3mg/kg。连续观察Ⅱ导ECG,记录心律失常发生率及心律失常持续时间。

1.2.2 3种比例混合液对麻醉大鼠心脏血流动力学的影响 [3] 健康雄性大鼠40只,体重230~250g,随机分为3组;分别为混合液(1)组:(30mg TAU+1.5mg PRO)/kg;混合液(2)组:(100mg TAU+1.5mg PRO)/kg;混合液(3)组:(200mg TAU+1.5mg PRO)/kg。准备2套外径为1mm的聚已烯导管与连接电脑的压力换能器连通,用肝素盐水充满并排净气泡备用。大鼠用25%乌拉坦4.8ml/kg腹腔麻醉 后,仰卧固定,手术分离左右颈总动脉,将其中一支导管经右侧颈总动脉缓慢插入左心室,出现左室内压波形后固定;另一支导管插入左颈总动脉1cm固定;四肢皮下连接心电导联,连续同步观察左室内压、平均动脉压、标准Ⅱ导ECG,稳定30min后记录给药前心率(HR)、左室内压最大变化速率(±dp/dtmax)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP),各组iv相应混合液后分别记录给药后1、3、5、10、15min时各参数值。

1.3 薄层色谱法样品溶液的配制 普罗帕酮加高纯水稀释成0.15%溶液;牛磺酸加高纯水配成0.2%溶液;牛磺酸+普罗帕酮混合液含量为(0.2g TAU+0.15g PRO)%,将配好样品分别放置1h、24h、48h、5天、10天后分别做pH测定和薄层色谱分析,每个样品重复做3次。茚三酮溶液配制:95份0.2%茚三酮的正丁醇溶液加5份5%乙酸混匀。

1.4 薄层色谱条件 按文献 [4] 方法,将硅胶HF 254 与0.5%CMC按比例置研钵中,研匀后均匀铺在5cm×10cm玻璃板上,厚约1mm,干燥后于105℃箱活化,冷却后用微量注射器点样,点样量2μl,将放置同样时间的0.15%PRO溶液、0.2%TAU溶液及二者混合液分别点在同一薄板上,用氯仿和甲醇以2:1比例混合液作为展开剂,将点样板置入层析后密闭,15min后拿出、晾干,先置紫外荧光灯(254nm)可见PRO斑点,标出其形状及位置,然后喷茚三酮溶液可见TAU斑点。

1.5 不同时间混合剂pH值的测定 分别对刚配制好的、放置1h、24h、48h、5天、10天后的混合液用pH酸度计测量其pH值。

1.6 统计学分析 动物实验结果以X±s表示,用药前后各参数值的比较用配对t检验。组间比较用分组t检验。率的比较用X 2 检验。

2 结果

2.1 动物实验结果

2.1.1 TAU、PRO单剂联合给药与混合液给药对氯化钡诱发心律失常疗效比较 见表1。30mg/kg TAU与1.5mg/kg PRO联合给药与混合液给药组间抗心律失常作用差异无显著性。30mg/kg TAU与1.5mg/kg PRO混合液组和100mg/kg TAU与1.5mg/kg PRO混合液组间心律失常持续时间差异无显著性,但心律失常发生率差异有显著性(P<0.05),与200mg/kg TAU与1.5mg/kgPRO混合液组比较持续时间及发生率均差异无显著性。

表1 TAU、PRO联合用药及不同混合液抗BaCl 2 诱发大鼠心律失常模型的药效比较

注:与NS组比较, ˇ P<0.05, ˇˇ P<0.01;与混合组(1)比较, # P<0.05

2.1.2 不同混合液对心脏血流动力学的影响见表2。组1、组2给药后对心脏血流动力学各参数均无显著影响,组3 给药后显著降低了HR、+dp/dtmax及LVSP。表明200mg/kg TAU与1.5mg/kg PRO混合液对心肌具有负性肌力作用。各组给药前后-dp/dtmax、LVEDP差异均无显著性。

2.2 薄层色谱 放置不同时间的混合液均为澄明液体,无颜色变化,无气泡或沉淀产生。pH值结果:刚配制的混合 液及放置1h、24h、48h、5天、10天的混合液pH值分别为6.71±0.005,6.70±0.0047,6.71±0.005,6.72±0.0043,6.70±0.005,6.70±0.0046,差异无显著性。

表2 TAU、PRO不同混合液对麻醉大鼠血流动力学的影响

注:与给药前比较,ˇP<0.05,ˇˇP<0.01

图1紫外荧光灯下薄层色谱图 注:“。”依次为普罗帕酮样品溶液,混合液样品溶液,牛磺酸样品溶液

图2 茚三酮显色薄层色谱图 薄层色谱结果见图1、图2,展距为7.2cm,在紫外灯下分别见到2个斑点,PRO溶液显示1个斑点,混合液显示1个斑点,2个斑点的位置形状均一致。喷茚三酮后可见2个斑点,TAU溶液显示1个斑点,混合液显示1个斑点,2个斑点的位置、颜色与形状均一致。PRO的Rf=0.78,TAU的Rf=0.07。放置不同时间样品溶液之间及每个样品重复实验的色谱结果均一致,差异无显著性。

3 讨论

动物实验结果表明:TAU、PRO混合液对氯化钡诱发大鼠心律失常的对抗作用仍具有显著的协同效应,混合后药效没有减弱。30mg/kg~100mg/kg TAU与1.5mg/kg PRO混合液对此心律失常模型的作用显示剂量依赖性增加,同时对心肌收缩力无显著抑制作用。混合液放置10天内,色谱分析结果未发现二者混合后有新的斑点,初步判定没有新物质生成。结果提示二者组成复方具有可行性;TAU与PRO配伍最佳剂量为100mg/kg+1.5mg/kg。PRO临床常用于抗室性心律失常,但单用时剂量较大易引起心律失常及负性肌力作用。而TAU安全无毒,也具有抗心律失常作用。本研究剂量设计思路:尽可能减少PRO的用量,增加TAU的用量,以达到增强疗效减小毒性的目的。研究结果对TAU复方制剂的开发提供了初步的实验依据。

参考文献

1 李锦平,张明升,梁月琴.牛磺酸、普罗帕酮合用抗心律失常作用及对心肌收缩力的影响.中国药理学通报,2002,18(5):563-566.

2 陈奇.中药药理研究方法学,北京:人民卫生出版社,1996,883.

3 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学,北京:人民卫生出版社,1991,830.

4 马广慈.药物分析方法与应用,北京:科学出版社,2000,546-597.

基金项目:山西省高校科技开发项目 编号:2001048

作者单位:032200山西医科大学汾阳学院药理教研室

作者: 李锦平 贾培媛 李春英 李睿明 范军军 李卫萍 2005-6-30
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