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高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷的含量

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摘要:【摘要】目的建立排石利胆片中芍药苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:HypersilODS-3C18(4。结果芍药苷在0。结论该方法简单、快速、准确,可用于该制剂中芍药苷的质量控制。...

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  【摘要】 目的 建立排石利胆片中芍药苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:Hypersil ODS-3 C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82);检测波长为230 nm,流速1.0 mL/min。结果 芍药苷在0.06~0.36 μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.77%,RSD=1.35%(n=6)。结论 该方法简单、快速、准确,可用于该制剂中芍药苷的质量控制。

  【关键词】  排石利胆片;芍药苷;高效液相色谱法;含量测定

  Abstract:Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Paishilidan tablets by HPLC. Method Hypersil ODS-3 C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used, acetonitrile-0.1% phosphoric acid (18∶82) was the mobile phase, detection wavelength was at 230 nm, and the flow rate was 1.0 mL/min. Result The linear range of paeoniflorin was 0.06~0.36 μg, r=0.999 9, and the average recovery was 99.77% with RSD of 1.35% (n=6). Conclusion The method was simple, quick and accurate, and available for quality control of the preparation.

  Key words:Paishilidan tablets;paeoniflorin;HPLC;content determination

  排石利胆片由茵陈、柴胡(醋炙)、金钱草、龙胆、赤芍、郁金、蒲黄、大黄、五灵脂、芒硝10味中药组成,具有舒肝理气、排石利胆功能,用于治疗胆囊炎、胆石症,原方收载于《卫生部药品标准?中药成方制剂》第20册。张氏[1]报道了高效液相色谱(HPLC)法测定排石利胆颗粒中龙胆苦苷的含量。李氏等[2]报道了排石利胆片中绿原酸的含量测定方法。目前未见对其中芍药苷含量测定的报道。为确保制剂质量,我们建立了HPLC法测定排石利胆片中芍药苷含量的方法,现报道如下。

  1  仪器与试药

  岛津10A-vp高效液相色谱仪,SPD-ML0Avp二极管阵列检测器,Shimadzu CLASS-VP色谱工作站。岛津UV-1601紫外-可见光分光光度计。AS3120A型超声波清洗器。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110736- 200732),排石利胆片为陕西合生医药研究所剂型研发制剂,批号20090805、20090807、20090811。乙腈(色谱纯),纯化水,其他试剂为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件

  色谱柱:Hypersil ODS-3 C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82),检测波长为230 nm,流速1.0 mL/min。理论塔板数按芍药苷色谱峰计应不低于3 000。芍药苷与其他组分完全分离。

  2.2  溶液的制备

  2.2.1  对照品溶液  取芍药苷对照品适量,加甲醇制成含芍药苷0.024 mg/mL的溶液。

  2.2.2  供试品溶液  将供试品研为细粉,取约0.9 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,加甲醇约40 mL,摇匀,超声(120 W,40 kHz)处理30 min,放至室温,加甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。

  2.2.3  阴性对照溶液  按处方比例称取缺赤芍的药材,按照排石利胆片生产工艺制备后作为阴性样品,按“2.1.2”项下方法制成阴性对照溶液。

  2.3  干扰试验

  精密量取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL注入液相色谱仪,记录色谱图。对照品溶液与供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,阴性样品对测定无干扰。

  2.4  线性关系的考察

  分别精密吸取对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL注入液相色谱仪中,按上述色谱条件进行测定。以进样量X为横坐标,色谱峰面积Y为纵坐标,经线性回归,得回归方程:Y=1.724×106X-1.060×104,r=0.999 9。结果表明,芍药苷在0.06~0.36 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

  2.5  精密度试验

  精密吸取同一对照品溶液10 μL,连续进样5次,测定芍药苷的峰面积,结果RSD=1.67%(n=5)。

  2.6  重复性试验

  取同一批样品(批号20090805)5份,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,进样10 μL,结果芍药苷平均含量为4.92 mg/g, RSD=1.45%(n=5)。

  2.7  稳定性试验

  精密吸取同一供试品溶液10 μL,分别于0、2、6、12、24 h进样测定,结果RSD=1.70%(n=5),表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

  2.8  加样回收率试验

  精密称取已知含量样品(4.92 mg/g)6份,分别精密加入芍药苷对照品甲醇溶液(浓度为2.40 mg/mL)1 mL,再按供试品溶液制备方法制备,进样10 μL,测定计算回收率。结果见表1。

  表1  加样回收率试验结果(n=6)

  称样量

  (g) 供试品含

  量(mg) 加入量

  (mg) 测得量

  (mg) 回收率

  (%) 平均回收

  率(%) RSD

  (%)

  0.475 5 2.34 2.40 4.73  99.65

  0.486 0 2.39 2.40 4.81 100.83

  0.482 5 2.37 2.40 4.74  98.63 99.77 1.35

  0.492 5 2.42 2.40 4.82  99.91

  0.486 2 2.39 2.40 4.83 101.62

  0.475 5 2.34 2.40 4.73  99.65

  2.9  样品含量测定

  按供试品溶液制备方法制备供试液,进样10 μL测定,照外标法计算样品中芍药苷含量,结果见表2。

  表2  芍药苷含量测定结果

  批号 芍药苷含量(mg/g)

  20090805 4.92

  20090807 4.25

  20090811 4.26

  3  讨论

  经对芍药苷紫外扫描,在230 nm处有最大吸收,因此,检测波长选取230 nm。

  供试品溶液的制备我们先考察了热回流法,结果随着时间增加,含量有降低趋势。这可能与芍药苷对热不稳定有关[3]。因此选用超声提取法。在提取时间上,考察了超声处理15、30、45 min,结果超声30 min时含量较高。在供试品溶液制备中分别考察了50%乙醇、甲醇超声30 min提取,结果两者含量无明显差异,但50%乙醇提取液色谱基线杂质峰较多,因此,供试品溶液制备采用甲醇提取。

  【参考文献】

  [1] 张虹.高效液相色谱法测定排石利胆颗粒中龙胆苦苷的含量[J].中国药师,2008,11(8):953-954.

  [2] 李瑞莲,雷玉萍.排石利胆片质量标准的研究[J].中国药品标准,2006, 7(6):49-50.

  [3] 陈世虎,李国华.乳核内消颗粒中芍药昔的稳定性研究[J].中药材, 2005,28(11):1038-1039.

 

作者: 2011-4-30
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